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                          微生物直接計數法及測微技術

                          發布時間:2021/04/07 10:59:50

                          一、實驗目的
                          1、了解血球計數板計數原理,并掌握計數方法。
                          2、掌握用測微尺測定微生物大小的方法。
                          二、實驗原理
                          顯微鏡直接計數法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計數板的計數室中,于顯微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法.因為計數板是一塊特別的載玻片.其上由四條槽構成三個平臺;中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半,每一邊的平臺上各刻有一個方格網,每個方格網共分為九個大方格,一種是一個大方格分成25個中方格,而每個中方格又分成16個小方格(見圖2—3—44);另一種是一個大方格分成16個中方格,每個中方格又分成25個小方格,無論哪種每個大方格中的小方格都是400個.每一個大方格邊長為0.1mm,所以計數室的容積為0.1mm3.計數時,通常只用5個中格內的菌體(孢子)數即可.然后求出每個中方格的平均值,再乘上25或16,得出一個大方格中的總茵數,再換算成lml菌液中的總菌數.若設5個中方格中總菌數為N,菌液稀釋倍數為M,如果是25個中方格計數板,則計算方法為:
                          lml菌液中的總菌數=平均每個中格中菌的個數×25×104×M=50000N?M(個)
                          微生物細胞的大小是微生物基本的形態特征,也是分類鑒定的依據之一.微生物大小的測定,需要在顯微鏡下,借助于特殊的測量工具——測微尺,包括目鏡測微尺和鏡臺測微尺.鏡臺測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片,一般是將1mm等分為100格,每格長0.01mm(即10pm).鏡臺測微尺并不直接用來測量細胞的大小,而是用于校正目鏡測微尺每格的相對長度。
                          三、試劑與器材
                          1、材料 釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養物。
                          2、實驗器材 細胞計數板、顯微鏡、蓋玻片、無菌毛細滴管、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。
                          四、實驗內容
                          1、微生物直接計數法 菌懸液制備→鏡檢計數室→加樣品→顯微鏡計數→清洗血細胞計數板
                          2、微生物測微技術 裝目鏡測微尺→校正→菌體大小測定
                          五、關鍵步驟及注意事項
                          1、防止加樣空氣泡產生。
                          2、調節顯微鏡光線的強弱適當。
                          六、思考題
                          1、根據你的體會,說明用血細胞計數板計數的誤差主要來自哪些方面?應如何盡量減少誤差、力求準確?
                          2、某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率,請設計1~2種可行的檢測方法。
                          3、為什么更換不同放大倍數的目鏡或物鏡時,必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正?

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